尹昊,陳西同,付邢言等.蝎子毒素多肽WaTx的高效化學合成及氧化折疊研究[J].化學學報,2022,80(04):444-452.
DOI: 10.6023/A21120580
蝎子毒素多肽WaTx的高效化學合成及氧化折疊研究
尹昊1,2陳西同1,2付邢言1,2馬艷楠1,2徐以梅1,2張?zhí)?,2梁帥1,2杜姍姍3齊昀坤1,2王克威1,2
1. 青島大學藥學院2. 青島大學創(chuàng)新藥物研究院3. 青島科技大學化工學院
摘要：相比于1-羥基-7-氮雜苯并三氮唑(HOAt)、1-羥基苯并三唑(HOBt)等傳統(tǒng)偶聯(lián)試劑,新型多肽偶聯(lián)試劑2-肟氰乙酸乙酯(Oxyma)具有安全、偶聯(lián)效率高、消旋率低等優(yōu)勢,在多肽合成特別是微波固相合成中得到廣泛應用.但是,不同反應溫度(例如28、50和75℃)對N,N’-二異丙基碳二亞胺(DIC)/Oxyma的偶聯(lián)效率以及對甲硫氨酸(Met)等易氧化氨基酸的影響尚有待研究.瞬時受體電位錨蛋白1(TRPA1)通道在感受溫度、聽覺和炎癥痛中發(fā)揮重要作用.蝎子毒素多肽芥末受體毒素(WaTx)是一種新型、非共價結(jié)合的TRPA1特異性激動劑.本研究利用6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)/N,N’-二異丙基乙胺(DIEA)和DIC/Oxyma縮合體系,首次探索了不同溫度下線性WaTx的合成效率以及Met殘基的氧化情況.通過一次氧化折疊和兩次氧化折疊策略,實現(xiàn)了WaTx的體外快速復性折疊,利用圓二色譜和鈣熒光檢測等技術(shù)評價WaTx的結(jié)構(gòu)和活性.本研究建立了WaTx的溫和、高效合成以及復性折疊方法,為固相多肽合成特別是手動固相合成WaTx等含有易氧化基團的二硫鍵構(gòu)象鎖定多肽提供了重要參考.
關鍵詞： N,N’-二異丙基碳二亞胺(DIC);Oxyma;固相多肽合成;二硫鍵;氧化折疊;芥末受體毒素(WaTx);多肽毒素;
基金資助： 國家自然科學基金(Nos.21807063,82003647,22177058,81870653)資助項目；
專輯： 工程科技Ⅰ輯
專題： 化學
分類號： O629.72
蝎子毒素多肽WaTx的高效化學合成及氧化折疊研究
尹昊|陳西同|付邢言|馬艷楠|徐以梅|張?zhí)貄梁帥|杜姍姍|齊昀坤|王克威
青島大學藥學院| 青島大學創(chuàng)新藥物研究院| 青島科技大學化工學院
N,N’-二異丙基碳二亞胺(DIC)|Oxyma|固相多肽合成|二硫鍵|氧化折疊|芥末受體毒素(WaTx)|多肽毒素
文章目錄
1 引言
2 結(jié)果與討論
2.1 線性多肽的合成和分離純化
2.1.1 28℃下合成肽1
2.1.2 75℃下合成肽2和肽3
2.1.3 Met替換成Nle,合成肽4～6
2.1.4 50℃下合成肽7和肽8
2.2 線性Wa Tx的復性折疊
2.3 Wa Tx的質(zhì)譜和圓二色譜分析
2.4 Wa Tx的活性測定
3 結(jié)論
4 實驗部分
4.1 固相多肽合成
4.1.1 樹脂的活化以及Fmoc脫保護
4.1.2 基于HCTU/DIEA的氨基酸縮合
4.1.3 基于DIC/Oxyma的氨基酸縮合,反應溫度為50℃
4.1.4 基于DIC/Oxyma的氨基酸縮合,反應溫度為75℃
4.1.5 切肽及多肽的沉淀
4.2 多肽的分離純化
4.3 氧化折疊流程
4.3.1 一次氧化折疊策略
4.3.2 兩次氧化折疊策略
4.4 圓二色譜測試
4.5 Flexstation 3胞內(nèi)鈣流檢測
蝎子毒素多肽WaTx的高效化學合成及氧化折疊研究
尹昊|陳西同|付邢言|馬艷楠|徐以梅|張?zhí)貄梁帥|杜姍姍|齊昀坤|王克威
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N,N’-二異丙基碳二亞胺(DIC)|Oxyma|固相多肽合成|二硫鍵|氧化折疊|芥末受體毒素(WaTx)|多肽毒素
尹昊,陳西同,付邢言等.蝎子毒素多肽WaTx的高效化學合成及氧化折疊研究[J].化學學報,2022,80(04):444-452.
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